重組細(xì)胞因子溶解注意事項(xiàng)

 

1．離心（Centrifuge）：高速離心 (10, 000 rpm) 20-30 秒，或低速離心 (2, 000 rpm) 5 分鐘。

 

2．溶解（Reconstitution）：用去離子水或其它緩沖液（根據(jù)說明書要求進(jìn)行選擇）溶解至說明書要求的濃度 (一般為 0.1-1.0 mg/ml)。溶解時(shí)不可振蕩，避免因化學(xué)鍵的斷裂造成蛋白失活，可加入適當(dāng)?shù)娜軇┹p搖并靜置一段時(shí)間，待細(xì)胞因子全部溶解后使用。溶劑的選擇： 

1）要求用去離子水溶解的產(chǎn)品，務(wù)必不可用鹽溶液，避免過高的鹽濃度造成蛋白不可逆的析出； 

2) 要求用鹽溶液溶解的產(chǎn)品，請依照說明書上的濃度，同樣也是為了避免過高的鹽濃度。

 

3．分裝和貯存（Aliquot and Storage）：蛋白溶解后可根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)一步稀釋成工作液，稀釋可用RPMI 1640、DMEM 或PBS 等溶液。工作液在4℃可保存1 周，如需長期保存，最好在稀釋液中加入10%的FCS（小牛或胎牛血清）或0.1 %的BSA（牛血清白蛋白）或5% HAS（人血清白蛋白）來穩(wěn)定蛋白，然后需分裝凍存于-20℃ （注意：不可凍存于-50℃以下）。分裝時(shí)每管中工作液的體積最好是一次實(shí)驗(yàn)的用量，以實(shí)現(xiàn)每次實(shí)驗(yàn)用完一支工作液，避免反復(fù)凍融引起蛋白活性的降低。

 

細(xì)胞因子量極微，所以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)牟僮魇潜匦璧?，任何不適當(dāng)?shù)娜芙舛紩斐蓪?shí)驗(yàn)的失敗，